Antimicrobial properties of heterocyclic compounds against clinical mastitis isolates / Propriedades antimicrobianas de compostos heterocíclicos contra isolados de mastite clínica

Mastitis causes significant economic losses to the dairy cattle industry. The present study aimed to evaluate the antibacterial properties of 39 heterocyclic derivatives (1,3-thiazoles and 4-thiazolidinones) against clinical mastitis isolates from dairy cows. Milk samples were collected from cows with clinical mastitis and the bacterial species were identified by PCR. Antibacterial activity was assessed using the broth microdilution method. First, 39 heterocyclic compounds were tested against four bacterial isolates (Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium bovis and Escherichia coli) randomly chosen from those recovered from the milk samples (Study 1). Subsequently, the compounds with the strongest antibacterial activity were tested against all the bacterial isolates recovered from the milk samples (Study 2). 1,3-thiazoles showed the strongest antibacterial activity, specially compounds 30 and 38, which also showed bactericidal properties according to their minimal inhibitory concentration (MIC) and minimal bactericidal concentration (MBC) values. Corynebacterium spp. and Enterobacteriaceae isolates were the most susceptible to compounds 30 and 38. Compounds 30 and 38 are promising targets for new antimicrobial agents.(AU)

A mastite causa significativas perdas econômicas à indústria leiteira bovina. O presente estudo teve como objetivo avaliar as propriedades antibacterianas de 39 derivados heterocíclicos (1,3-tiazóis e 4-tiazolidinonas) contra isolados clínicos de mastite em vacas leiteiras. Amostras de leite foram coletadas de vacas com mastite clínica e as espécies bacterianas isoladas foram identificadas por PCR. A atividade antibacteriana foi avaliada pelo método de microdiluição em caldo. Primeiramente, os 39 compostos heterocíclicos foram testados contra quatro isolados bacterianos (Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium bovis e Escherichia coli) escolhidos aleatoriamente dentre os recuperados das amostras de leite (Estudo 1). Posteriormente, compostos com atividade antibacteriana mais forte foram testados contra todos os isolados bacterianos recuperados das amostras de leite (Estudo 2). Os compostos 1,3-tiazóis apresentaram a maior atividade antibacteriana, principalmente os compostos 30 e 38, que também apresentaram propriedades bactericidas de acordo com seus valores de concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM). Os isolados Corynebacterium spp. e Enterobacteriaceae foram os mais suscetíveis aos compostos 30 e 38. Os compostos 30 e 38 mostraram-se promissores como novos agentes antimicrobianos.(AU)

Antimicrobial properties of heterocyclic compounds against clinical mastitis isolates

ABSTRACT: Mastitis causes significant economic losses to the dairy cattle industry. The present study aimed to evaluate the antibacterial properties of 39 heterocyclic derivatives (1,3-thiazoles and 4-thiazolidinones) against clinical mastitis isolates from dairy cows. Milk samples were collected from cows with clinical mastitis and the bacterial species were identified by PCR. Antibacterial activity was assessed using the broth microdilution method. First, 39 heterocyclic compounds were tested against four bacterial isolates (Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium bovis and Escherichia coli) randomly chosen from those recovered from the milk samples (Study 1). Subsequently, the compounds with the strongest antibacterial activity were tested against all the bacterial isolates recovered from the milk samples (Study 2). 1,3-thiazoles showed the strongest antibacterial activity, specially compounds 30 and 38, which also showed bactericidal properties according to their minimal inhibitory concentration (MIC) and minimal bactericidal concentration (MBC) values. Corynebacterium spp. and Enterobacteriaceae isolates were the most susceptible to compounds 30 and 38. Compounds 30 and 38 are promising targets for new antimicrobial agents.

RESUMO: A mastite causa significativas perdas econômicas à indústria leiteira bovina. O presente estudo teve como objetivo avaliar as propriedades antibacterianas de 39 derivados heterocíclicos (1,3-tiazóis e 4-tiazolidinonas) contra isolados clínicos de mastite em vacas leiteiras. Amostras de leite foram coletadas de vacas com mastite clínica e as espécies bacterianas isoladas foram identificadas por PCR. A atividade antibacteriana foi avaliada pelo método de microdiluição em caldo. Primeiramente, os 39 compostos heterocíclicos foram testados contra quatro isolados bacterianos (Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium bovis e Escherichia coli) escolhidos aleatoriamente dentre os recuperados das amostras de leite (Estudo 1). Posteriormente, compostos com atividade antibacteriana mais forte foram testados contra todos os isolados bacterianos recuperados das amostras de leite (Estudo 2). Os compostos 1,3-tiazóis apresentaram a maior atividade antibacteriana, principalmente os compostos 30 e 38, que também apresentaram propriedades bactericidas de acordo com seus valores de concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM). Os isolados Corynebacterium spp. e Enterobacteriaceae foram os mais suscetíveis aos compostos 30 e 38. Os compostos 30 e 38 mostraram-se promissores como novos agentes antimicrobianos.

Gangrenous mastitis in sheep caused by multidrug-resistant Staphylococcus haemolyticus / Mastite gangrenosa em ovinos causada por Staphylococcus haemolyticus multirresistente

Mastitis is a multifactorial disease and considered one of the most critical problems in the dairy industry worldwide. The condition is characterized by reduced milk and several abnormalities in the mammary gland. This study aimed to report an outbreak of gangrenous mastitis caused by multidrug-resistant Staphylococcus haemolyticus in a Santa Inês sheep herd. Eighteen sheep were affected, and five of them with severe clinical pictures were examined. The clinical and pathological picture were variable and characterized by apathy, anorexia, emaciation, opaque and brittle hair, apparent and congested episcleral vessels, and hyperthermia. These ewes had enlarged, firm, and painful mammary glands. Macroscopically, these lesions consisted of severe gangrenous mastitis, and microscopically, the primary lesions consisted of necrosis, thrombosis, and fibrosis of the mammary parenchyma. Milk samples from one of the five severely affected ewes were collected and cultured under aerobic or microaerophilic incubation at 37°C for 24 hours on sheep blood agar. The obtained colonies were then submitted to MALDI-TOF for speciation. The colonies were also submitted to an antimicrobial susceptibility test, genotyping of virulence factors and resistance genes were also performed. The isolates showed antimicrobial multiresistance since they were resistant to seven out of 13 tested antibiotics. The isolates were also positive for two staphylococcal enterotoxigenic genes (sec and see) and fibronectin-binding protein B (fnbB).(AU)

A mastite é uma doença multifatorial e é considerada um dos problemas mais importantes na indústria de laticínios no mundo todo. A condição é caracterizada pela redução de leite e várias anormalidades na glândula mamária. O objetivo deste estudo foi relatar um surto de mastite gangrenosa causada por Staphylococcus haemolyticus multirresistente em um rebanho ovino Santa Inês. Dezoito ovelhas foram afetadas e cinco delas com quadro clínico severo foram examinadas. O quadro clínico-patológico era variável quanto a severidade e consistia em apatia, anorexia, magreza, pelos opacos e quebradiços e vasos episclerais aparentes e ingurgitados. As ovelhas apresentavam glândulas aumentadas, firmes e dolorosas. Macroscopicamente, as principais lesões consistiam em mastite gangrenosa e microscopicamente havia necrose do parênquima glandular, trombose e fibrose. Amostras de leite de uma das cinco ovelhas severamente afetadas foram coletadas e cultivadas sob incubação aeróbica ou microaerofílica a 37°C por 24 horas em ágar sangue de ovelha. As colônias obtidas foram então submetidas ao MALDI-TOF para especiação. Além disso, as colônias foram submetidas a um teste de suscetibilidade antimicrobiana e foi realizada a genotipagem de fatores de virulência e genes de resistência. Os isolados apresentaram multirresistência antimicrobiana por serem resistentes a sete dos 13 antibióticos testados. Os isolados também foram positivos para dois genes enterotoxigênicos estafilocócicos (sec e see) e proteína B de ligação à fibronectina (fnbB).(AU)

Occurrence of anti-Toxoplasma gondii antibody and evaluation of risk infection factors in goats raised in Sergipe state, Brazil / Ocorrência de anticorpo anti-Toxoplasma gondii e avaliação de fatores de risco de infecção em caprinos criados no estado de Sergipe, Brasil

The objective was to determine, through indirect immunofluorescence reaction (RIFI, 1:64), the occurrence of IgG antibodies to Toxoplasma gondii and the risk factors associated with infection in goats in the state of Sergipe. To this study were used 675 samples of blood of animals from 41 farms of the three state mesoregions from 2013 to 2014. The occurrence of seropositive goats was 30.07%, with 90.24% of farms with seropositive animals. The distribution of titers obtained was 37.93%, 11.82%, 17.24%, 18.22%, and 17.77% for 64, 128, 512 and 1024 respectively. The risk factors observed were farms that did not have facilities (p=0.000, OR=2.30, CI 95%=1.41-3.74), with flooded soils (p=0.011, OR=2.94, CI 95%=1.27-6.79), which provided feed on the ground (p=0.032, OR=1.69, CI 95%=1.04-2.74), in uncovered cages (p=0.032, OR=1.69, CI 95%=1.04-2.74), pasture-based feed (p=0.003, OR=3.52, CI 95%=1.53-8.09), with access from cats to (p=0.031, OR=1.45, CI 95%=1.03-2.04) and introduced new breeders in the last five years (p=0.036, OR=1.58, CI 95%=1.02-2.74).(AU)

O objetivo desse estudo foi determinar, através da reação de imunofluorescência indireta (RIFI, 1:64), a ocorrência de anticorpos IgG para o Toxoplasma gondii e os fatores de risco associados à infecção em rebanhos caprinos do estado de Sergipe, a partir de 675 amostras de sangue de animais de 41 propriedades das três mesorregiões do estado entre os anos de 2013 e 2014. A ocorrência de caprinos soropositivos foi de 30,07% com 90,24% de propriedades com animais soropositivos. A distribuição dos títulos obtidos foi de 37,93%, 11,82%, 17,24%, 18,22% e 17,77% para 64, 128, 512 e 1024 respectivamente. Os fatores de riscos observados foram propriedades que não possuíam instalações (p=0,000, OR=2,30, IC 95%=1,41-3,74), com terrenos alagados (p=0,011, OR=2,94, IC 95%=1,27-6,79), que disponibilizam a ração no chão (p=0,032, OR=1,69, IC 95%=1,04-2,74), em cochos descobertos (p=0,000, OR=1,97, IC 95%=1,32-2,94), alimentação à base de pastagem (p=0,003, OR=3,52, IC 95%=1,53-8,09), com acesso de gatos à fonte de água (p=0,031, OR=1,45, IC 95%=1,03-2,04) e que introduziram novos reprodutores nos últimos cinco anos (p=0,036, OR=1,58, IC 95%=1,02-2,74).(AU)

Ocurrence and risk factors associated with Mycoplasma agalactiae infection in dairy goat herds of Paraíba State, Brazil / Ocorrência e fatores de risco associados à infecção por Mycoplasma agalactiae em rebanhos caprinos leiteiros do estado da Paraíba, Brasil

Mycoplasmosis is a disease that may cause severe economical losses in goat and sheep herds, and it is associated with mastitis, polyarthritis, agalactia, conjunctivitis, pneumonia and reproductive failure. The objective of this study was to determine the occurrence of Mycoplasma agalactiae in milk samples and investigate the main risk factors associated with infection in goats from farms of the state of Paraíba, Brazil. For Mycoplasma agalactiae diagnosis, 251 milk samples were submitted to DNA extraction using a commercially available kit, following the manufacturer's instructions and Polymerase Chain Reaction (PCR) was performed. In addition, questionnaires were applied to identify the main risk factors associated with contagious agalactia. Out of the two hundred fifty-one samples analyzed, 50 (19.9%, I.C. 15.1-25.4%) were PCR positive for M. agalactiae. In the risk factors analysis, some associations were observed for the following variables: size of the herd (P<0.001, OR=7.1, I.C. 2.4-20.6), replacement of farm animals (P<0.001, OR=4.7, I.C. 1.8-12.2) and participation of animals in fairs and exhibitions (P=0.029, OR=2.0, I.C.1.0-3.9). The results allowed confirming the occurrence of Mycoplasma agalactiae in milk samples of goats from Paraíba. Therefore, it is strictly necessary to monitor dairy goat flocks and to raise the awareness of farmers about the economic importance of the disease, since it causes severe economic losses for producers of the state. Identification of risk factors is essential for adoption of control measures and for the correction of the management factors in farms where there are animals with positive diagnosis, avoiding, so, pathogen dissemination.(AU)

As micoplasmoses ocasionam prejuízos econômicos nas criações de ovinos e caprinos, e estão associados com quadros de mastite, poliartrite, agalaxia, conjuntivite, pneumonia e falhas reprodutivas. Objetivou-se neste estudo determinar a ocorrência de Mycoplasma agalactiae em amostras de leite e investigar os principais fatores de risco associados à infecção em caprinos provenientes de propriedades rurais do estado da Paraíba, Brasil. Para o diagnóstico de Mycoplasma agalactiae, foram analisadas 251 amostras de leite, que foram submetidas à extração do DNA genômico usando um kit comercial, seguindo as recomendações do fabricante. Para diagnóstico da infecção utilizou-se a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Além disso, foram aplicados questionários para identificar os principais fatores de risco associados infecção à agalaxia contagiosa. Das 251 amostras analisadas, 50 (19,9%; I.C. 15,1-25,4%) foram positivas na PCR para M. agalactiae. Observaram-se na análise dos fatores de risco, algumas associações para as seguintes variáveis: tamanho do rebanho (P<0,001; OR 7,1), reposição de animais da propriedade (P<0,001; OR 4,7) e participação dos animais em feiras e exposições (P= 0,029; OR 2,0). Os resultados permitiram confirmar a ocorrência do Mycoplasma agalactiae em amostras de leite de caprinos da Paraíba. Portanto, é necessário o monitoramento dos rebanhos caprinos leiteiros e a conscientização dos produtores rurais para a importância econômica da doença, visto que a mesma acarreta severos prejuízos econômicos para os produtores do estado. A identificação dos fatores de risco são imprescindíveis para a adoção de medidas de controle e para a correção dos fatores de manejo em propriedades que tenham animais com diagnóstico positivo, evitando assim, a disseminação do patógeno.(AU)

Serological response to Neospora caninum infection in goats and agreement between three diagnostic techniques to detect caprine neosporosis / Resposta sorológica à infecção por Neospora caninum em cabras e concordância entre três técnicas diagnósticas para detecção de neosporose caprina

The present study aimed to measure the serological response of goats infected with Neospora caninum by assessing the diagnostic performance and agreement between three techniques (indirect immunofluorescent antibody test, IFAT; Neospora agglutitation test, NAT; enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA). The panel of sera were comprised of 500 samples of goats, and 60 reference serum samples. These reference and field serum samples were tested by ELISA, NAT, and IFAT. In the field serum samples tested, the seroprevalences of anti-N. caninum antibodies were 3.2%, 4.6%, and 6.4% in the NAT, IFAT and ELISA, respectively. Using the IFAT as the gold standard, the NAT and the ELISA agreement was considered weak (k=0.28) and strong (k=0.75), respectively. When the IFAT performance was used for comparison purposes, the ELISA showed 91.3% sensitivity and 97.7%, specificity with a PPV of 65.2% and a NPV of 99.6%; The NAT presented sensitivity of 26.1% and specificity of 97.9% with a PPV of 37.5% and a NPV of 96.5%. Accordingly, the IFAT should remain the assay of choice for studies about N. caninum infection in goats in individual serum samples. A combination of serological assays with high sensitivity and specificity is recommended in serosurveys of caprine neosporosis.(AU)

Objetivou-se avaliar a resposta sorológica de caprinos infectados com Neospora caninum mediante o estudo da performance e concordância de três técnicas sorológicas (RIFI, NAT e ELISA). O painel de soros testes foi composto por 500 amostras de caprinos e ainda 60 soros classificados como de referência. Todos os soros de referência e de campo foram testados por ELISA, NAT e RIFI. Nos soros de campo, as soroprevalências de anticorpos anti-N. caninum foram de 3,2% no NAT, 4,6% na RIFI e 6,4% no ELISA. Utilizando a RIFI como técnica de referência, a concordância de NAT e ELISA foi considerada fraca (k=0,28) e substancial (k=0,75), respectivamente. Ainda utilizando a RIFI como comparação, foram obtidos valores de sensibilidade de 91,3% e 97,7% de especificidade no ELISA, e valores preditivos positivo de 65,2% e negativo de 99,6%; NAT apresentou resultados de sensibilidade de 26,1% e de especificidade de 97,9% com valores preditivos positivo de 37,5% e negativo de 96,5%. Com base nos resultados deste trabalho, sugerimos que a RIFI permaneça como técnica de escolha no estudo da neosporose caprina em amostras individuais, resguardando as recomendações e pontos de corte adotados neste estudo. Indicamos a associação de técnicas sorológicas de alta sensibilidade e especificidade.(AU)

Frequency of Staphylococcus aureus virulence genes in milk of cows and goats with mastitis / Frequência de genes fatores de virulência de Staphylococcus aureus em leite de vacas e cabras com mastite

The present study determined the frequency of Staphylococcus aureus virulence genes in 2,253 milk samples of cows (n=1000) and goats (n=1253) raised in three different geographical regions of the state Pernambuco, Brazil. The presence of genes of virulence factors associated to adhesion to host cells (fnbA, fnbB, clfA and clfB), toxinosis (sea, seb, sec, sed, seg, seh, sei, tsst, hla and hlb), and capsular polysaccharide (cap5 and cap8) was evaluated by PCR. A total of 123 and 27 S. aureus strains were isolated from cows' and goats' milk, respectively. The sec and tsst genes were detected exclusively in goats' isolates, while the seh gene was only identified in cows' isolates. The number of toxin genes per strain showed that goats' isolates are likely more toxic than bovines' isolates. The cap5 genotype predominated in both host species, especially in strains collected from cows raised in the Agreste region. The cap8 genotype is likely more virulent due to the number of virulence genes per strain. The results of the present study demonstrate that S. aureus may pose a potential threat to human health in Brazil, and, therefore, these results should support actions related to mastitis control programs.(AU)

O presente estudo determinou a frequência de genes de virulência de Staphylococcus aureus em 2253 amostras de leite, sendo de vacas n=1000 e de cabras n=1253, procedentes das três regiões geográficas do estado de Pernambuco, Brasil. A presença de genes de fatores de virulência associados à adesão às células hospedeiras (fnbA, fnbB, clfA e clfB), toxinosis (sea, seb, sec, sed, seg, seh, sei, tsst, hla e hlb) e polissacarídeo capsular (cap5 e cap8) foram avaliadas por PCR. Um total de 123 e 27 cepas de S. aureus foram isoladas do leite de vacas e cabras, respectivamente. Os genes sec e tsst foram detectados exclusivamente em isolados de cabras, enquanto o gene seh foi identificado apenas em isolados de vaca. O número de genes de toxina por cepa mostrou que os isolados de cabras são potencialmente mais tóxicos do que os isolados obtidos de bovinos. O genótipo cap5 predominou em ambas as espécies hospedeiras, especialmente em cepas coletadas de vacas criadas na região Agreste. O genótipo cap8 é potencialmente mais virulento devido ao número de genes de virulência por isolado. Os resultados do presente estudo demonstram que S. aureus pode representar uma ameaça potencial para a saúde humana no Brasil e, portanto, estes resultados devem subsidiar ações relacionadas aos programas de controle de mastite.(AU)

Padronização de multiplex PCR para detecção de dermatófitos em pelos e crostas de cães e gatos / Standardization of a PCR multiplex for the detection of dermatophytes in dogs and cats fur and crusts

Objetivou-se padronizar uma reação do tipo multiplex PCR (mPCR) para detectar Microsporum canis, Microsporum gypseum e o complexo Trichophyton mentagrophytes em amostras de pelos e/ou crostas de cães e gatos. 250 amostras de pelos e/ou crostas de cães e gatos foram analisadas por meio de exame direto e cultura, o DNA das mesmas foi extraído para mPCR. Primers foram desenhados e como controle positivo da reação utilizou-se o DNA extraído de colônias de M. canis (URM 6273), M. gypseum (URM 6921) e T. mentagrophytes (URM 6211), provenientes da Coleção de Culturas (Micoteca URM), Departamento de Micologia, Centro de Ciências Biológicas da Universidade Federal de Pernambuco (CCB/UFPE). Como controles negativos de reação, utilizou-se água destilada esterilizada e DNA extraído de Alternaria sp. para verificar a especificidade dos primers. Do total de amostras analisadas, 15 (6%) foram identificadas, em cultura, como dermatófitos, e destas, 10 foram M. canis, três M. gypseum e dois T. mentagrophytes (complexo). Destas 15 amostras positivas, 11 (73,3%) foram detectadas por meio da mPCR. Além destas, seis outras, negativas em cultura, foram identificadas como M. gypseum. Verificou-se uma boa concordância entre os resultados da cultura e mPCR (Kappa: 0,66). O protocolo padronizado neste estudo pode ser utilizado como um método de triagem, por apresentar uma sensibilidade maior que a da cultura, usado paralelamente aos exames de rotina, permitindo um diagnóstico em menor tempo.(AU)

The aim of this study was to standardize a multiplex PCR (mPCR) reaction to detect Microsporum canis, Microsporum gypseum and the Trichophyton mentagrophytes complex in dog and cat fur and/or crusts. 250 fur and/or crusts samples from dogs and cats were analyzed by direct examination and culture, DNA from them was extracted for mPCR. Primers were designed and the DNA extracted from colonies of M. canis (URM 6273), M. gypseum (URM 6921) and T. mentagrophytes (URM 6211) from the Collection of Cultures - URM Micoteca - Department of Mycology, Biological Sciences Center of the Federal University of Pernambuco (CCB / UFPE). As negative controls, sterile distilled water and DNA extracted from Alternaria sp., were used to verify the specificity of the primers. Of the total samples analyzed, 15 (6%) were identified in culture as dermatophytes, and of these, 10 were M. canis, three M. gypseum and two T. mentagrophytes (complex). Of these 15 positive samples, 11 (73.3%) were detected by mPCR. Besides these, six others, negative in culture, were identified as M. gypseum. There was good agreement between culture results and mPCR (Kappa: 0.66). The protocol standardized in this study can be used as a screening method, because it has a sensitivity greater than that of the culture, used in parallel to the routine exams, allowing a diagnosis in a shorter time.(AU)

Surto de esporotricose felina na região metropolitana do Recife / Outbreak of feline sporotrichosis in the metropolitan area of Recife

A esporotricose é uma micose subcutânea, causada por um fungo dimórfico do complexo Sporothrix schenckii que acomete várias espécies, especialmente a felina, causando comprometimento local, disseminado ou sistêmico. Objetivou-se relatar a ocorrência de um surto de esporotricose felina na Região Metropolitana do Recife. Foram coletados suabes de úlceras cutâneas de felinos atendidos no Hospital Veterinário da Universidade Federal Rural de Pernambuco e em Clínicas Veterinárias particulares. O diagnóstico foi realizado por meio de exame citológico e cultura fúngica. Dos 115 casos suspeitos, 59 casos foram confirmados, número nunca registrado anteriormente no estado de Pernambuco. Os casos de esporotricose felina registrados têm demonstrado aspectos clínicos e epidemiológicos semelhantes aos ocorridos em outras regiões do país, caracterizando-se como uma doença predominantemente de machos jovens em idade reprodutiva e semi-domiciliados, de difícil tratamento e de rápida disseminação.(AU)

Sporotrichosis is a subcutaneous mycosis caused by a dimorphic fungus from Sporothrix schenckii complex, which affects various species, especially feline, able to cause local, disseminated or systemic impairment. We aimed to report the occurrence of an outbreak of feline sporotrichosis in the Metropolitan Region of Recife. Swabs of skin ulcers in cats treated in the Veterinary Hospital of the Federal Rural University of Pernambuco and in particular veterinary establishments were collected. Diagnosis was made by cytological examination and fungal culture. From 115 suspicious cases, 59 cases were confirmed, unprecedented results in the state of Pernambuco. These registered cases of feline sporotrichosis have demonstrated clinical and epidemiological characteristics similar to those occurring in other regions of the country, characterized as a quick-spreading disease, of difficult treatment, which affects predominantly semi-domiciled young males in reproductive age.(AU)

Detecção de Aeromonas spp. e do gene de virulência aerolisina em tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus) com a técnica de mPCR / Detection of Aeromonas spp. and virulence gene aerolysin in Nile tilapia (Oreochromis niloticus) using PCR technique

As infecções causadas por bactérias do gênero Aeromonas estão entre as doenças mais comuns em peixes cultivados em todo o mundo, com ocorrência de aeromoniose em todos os países que possuem cultivo de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus). O presente trabalho descreve o desenvolvimento de uma nova multiplex PCR (mPCR) para diagnóstico de Aeromonas spp. e identificação do gene aerolisina (aerA). Para padronização da mPCR foram utilizadas cepas de referência de várias espécies do gênero Aeromonas e de outros gêneros. Também foram usadas cepas de campo de A. hydrophila oriundas de cultivos de peixes pacamãs (Lophiosilurus alexandri) e Aeromonas spp. de tilápias do Nilo. Os primers foram desenhados com base na região 16S rRNA e aerA. Para verificar a melhor temperatura de anelamento foram utilizados gradientes entre 59°C a 61°C com 40ng de DNA molde. Os produtos da amplificação da região 16S rRNA e do gene aerA apresentaram 786 e 550pb, respectivamente. A mPCR apresentou melhor temperatura de anelamento a 57,6°C com limite de detecção das concentrações de DNA em ambos genes (16S rRNA and aerA) de 10-10g/μL. A mPCR padronizada é rápida, sensível e específica no diagnóstico de Aeromonas spp. e identificação do gene aerolisina. Esta metodologia apresenta vantagens quando comparada aos métodos de diagnóstico convencionais, podendo ser utilizada em cultivos comerciais de tilápias do Nilo ou outros peixes. A identificação do gene aerolisina é uma importante ferramenta na determinação do potencial patogênico dos isolados de Aeromonas spp. estudados.(AU)

Infections caused by bacteria of the genus Aeromonas are among the most common diseases in fish farming systems worldwide, and this disease occurs in all countries which have Nile tilapia (Oreochromis niloticus) farmed. The present work describes the development of a new multiplex PCR (mPCR) technique that diagnosis the genus Aeromonas and detects aerolysin gene (aerA). Reference strains of several Aeromonas species and other genera were used for standardization of mPCR. Strains of A. hydrophila from "pacaman" fish (Lophiosilurus alexandri) and Aeromonas spp. from Nile tilapia from farming systems were used too. Primers were designed based on the 16S rRNA region and aerA (aerolysin toxin). To verify a better annealing temperature were used gradients between 59°C and 61°C with 40ng of the DNA template. The 16S rRNA gene and the aerA gene amplification products showed 786 and 550 bp, respectively. The mPCR showed better annealing temperature at 57.6°C, and the detection limit for both genes (16S rRNA and aerA) was 10-10g/μL of the DNA. The standardized mPCR is quick, sensitive, and specific for Aeromonas spp. diagnosis and to detect aerolysin gene. This method showed advantages when compared to the conventional diagnostic methods and can be used in Nile tilapia or other fish farming systems. The detection of aerolysin gene is an important tool to determine the potential pathogenicity of Aeromonas spp. isolates.(AU)

Isolation of Salmonella spp. in cattle egrets (Bubulcus ibis) from Fernando de Noronha Archipelago, Brazil

Abstract The growth of the population of cattle egrets (Bubulcus ibis) in the archipelago of Fernando de Noronha constitutes a threat to public health and biological diversity because of their competition with and predation on native species and the possibility of transmission of pathogens to human beings, livestock and native wildlife. The aim here was to search for, isolate and identify serovars of Salmonella in clinically healthy local cattle egrets. Cloacal swabs were obtained from 456 clinically healthy cattle egrets of both sexes and a variety of ages. The swabs were divided into 51 pools. Six of these (11.7%) presented four serovars of Salmonella enterica subspecies enterica: Salmonella serovar Typhimurium; Salmonella serovar Newport; Salmonella serovar Duisburg; and Salmonella serovar Zega. One sample was identified as S. enterica subspecies enterica O16:y:-. Results in this study suggest that cattle egrets may be reservoirs of this agent on Fernando de Noronha and represent a risk to public health and biological diversity.

Soropositividade e fatores de risco para leptospirose, toxoplasmose e neosporose na população canina do Estado da Paraíba / Seropositivity and risk factors for leptospirosis, toxoplasmosis and neosporosis in the canine population of Paraiba state, northeastern Brazil

Objetivou-se com este trabalho determinar a frequência de animais soropositivos para Leptospira spp., Toxoplasma gondii e Neospora caninum em cães do Estado da Paraíba, Nordeste do Brasil, bem como identificar fatores de risco. Foram amostrados 1.043 soros de cães procedentes de cinco centros urbanos considerados polos regionais: João Pessoa, Campina Grande, Patos, Sousa e Cajazeiras. Para o diagnóstico sorológico da infecção por Leptospira spp. foi utilizada a soroaglutinação microscópica (SAM) enquanto que para detecção de anticorpos anti-T. gondii e N. caninum empregou-se a reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Noventa e sete cães apresentaram aglutininas anti-Leptospiraspp., resultando em frequência de 9,3% (IC 95% = 7,5-11,1%). Os sorovares de maior frequência foram Icterohaemorragiae (47,4%), Copenhageni (16,5%), Bratislava (11,3%), Canicola (10,3%) e Pomona (6,2%). Observou-se soropositividade de 22,1% (231/1.043; IC 95% = 19,6-24,7%) e 7,7% (80/1.043; IC 95% = 6,1-9,3%) para T. gondii e N. caninum, respectivamente. Idade >48 meses (OR=2,92), raça não definida (OR=1,94) e criação com acesso à rua (OR=1,57) foram apontados como fatores de risco para infecção por Leptospira spp. Para toxoplasmose, as categorias idade >48 meses (OR=1,74), alimentação com comida caseira (OR=2,24), alimentação com ração e comida caseira (OR=2,34) e contato com gatos (OR=1,57) foram consideradas fatores de risco, enquanto que a criação com acesso à rua (OR=2,62) foi fator de risco para N. caninum. Conclui-se que cães de cinco centros urbanos do Estado da Paraíba estão expostos às infecções por Leptospiraspp., T. gondii e N. caninum, evidenciadas pela detecção de anticorpos, bem como sugere-se melhor manejo alimentar, controle no acesso a ambientes externos e destino adequado das fezes de gatos.(AU)

The aim of this study was to determine the frequency of seropositive animals for Leptospiraspp., Toxoplasma gondii and Neospora caninum in dogs from Paraiba state, northeastern Brazil, and to identify risk factors. A total of 1,043 sera were sampled from dogs from five urban centers considered as regional poles: João Pessoa, Campina Grande, Patos, Sousa and Cajazeiras. For the serological diagnosis of Leptospira spp. infection the microscopic agglutination test (MAT) was used, and for detecting anti-T. gondii and N. caninum antibodies the indirect fluorescent antiboy test (IFAT) was carried out. Ninety-seven dogs showed anti-Leptospira spp. agglutinins, resulting in a frequency of 9.3% (95% CI=7.5; 11.1%). The most frequente serovars were Icterohaemorragiae (47.4%), Copenhageni (16.5%), Bratislava (11.3%), Canicola (10.3%) and Pomona (6.2%). The seropositivities for T. gondii and N. caninum were 22.1% (231/1043; 95% CI=19.6; 24.7%) and 7.7% (80/1043; 95% CI=6.1; 9.3%) respectively. Age >48 months (OR=2.92), mixed breed (OR=1.94) and access to street (OR=1.57) were identified as risk factors for Leptospira spp. infection. For toxoplasmosis, the categories age >48 months (OR=1.74), homemade food (OR=2.24), comercial and homemade food (OR=2.34) and contact with cats (OR=1.57) were considered risk factors, while access to street (OR=2.62) was risk fator for N. caninum. We conclude that dogs from five urban centers in Paraiba state are exposed to Leptospira spp., T. gondii and N. caninum infections, evidenced by antibody detection, as well as it is suggested a better feed management, control of outside home environment access and proper disposal of cat feces.(AU)

Mastite bovina causada por Staphylococcus spp. resistentes à meticilina: revisão de literatura / Bovine mastitis caused by Staphylococcus spp. methicillin-resistant: literature review

Staphylococcus spp. são os micro-organismos mais relacionados a casos de mastite bovina. Algumas cepas destes micro-organismos têm apresentado fatores de virulência como genes de resistência a antimicrobianos com destaque para a resistência à meticilina que é um problema de saúde pública. Esta revisão de literatura tem o objetivo de compilar dados sobre a mastite bovina causada por Staphylococcus spp. resistente à meticilina (MRS). Apesar desse antimicrobiano não ser comumente utilizado no tratamento das mastites, a frequência de casos de infecção da glândula mamária causada por MRS tem variado entre 1,34 a 47,6%. Acredita-se que o contato dos humanos com animais positivos para MRS e vice-versa favoreça a transmissão deste patógeno entre as espécies, contribuindo para a variação nas taxas de infecção. A detecção de MRS pode ser realizada por meio de provas fenotípicas, moleculares ou sorológicas e as medidas de controle devem contemplar a identificação dos casos, segregação dos animais, estudo epidemiológico da fonte de infecção do rebanho, além da constante limpeza e higienização do ambiente de confinamento, equipamentos e utensílios de ordenha. Casos de mastite ocasionados por esse patógeno assumem relevância para a saúde pública, pois a ingestão de leite e/ou derivados contaminados podem desencadear a transferência de MRS para seres humanos. Com isso, é necessário um alerta constante quanto à vigilância epidemiológica em fazendas leiteiras.(AU)

The most related microorganism in cases of bovine mastitis are Staphylococcus spp. Some strains of these microorganisms have shown virulence factors like antibiotic resistance genes, such as the resistance to methicillin, which represents a public health problem. This literature review aims to compile data related to bovine mastitis caused by Staphylococcus spp. Methicillin-resistant (MRS). Despite this antimicrobial not be commonly used in the treatment of mastitis, the frequency of cases of infection of the mammary gland caused by MRS has ranged from 1.34 to 47.6%. It is believed that the contact of humans with animals positive for MRS and vice versa favors the transmission of this pathogen among species, contributing to the variation in infection rates. MRS detection can be performed by phenotypic tests, molecular tests or serological tests and control measures must be taken such as the identification of cases, animal segregation, epidemiological study of the infection source of herd and the constant cleanliness and hygiene of the confined environment, equipment and milking utensils. Mastitis cases caused by this pathogen are of great relevance to public health because the ingestion of contaminated and/or derived from milk may trigger the transfer of MRS for human. Thus, a constant warning is required on the epidemiological surveillance in dairy farms.(AU)

Soroprevalência de Toxoplasma gondii em equídeos do Nordeste do Brasil / Seroprevalence of Toxoplasma gondii in equidae from Northeast Brazil

Este estudo teve como objetivo determinar a soroprevalência da toxoplasmose em equídeos mantidos em diferentes formas de manejo no estado de Pernambuco. Para tanto, um total de 400 amostras de soro sanguíneo de equídeos clinicamente saudáveis foram analisados através do teste de aglutinação modificado (MAT) considerando-se cut-off de 1:25. Dados referentes às características dos animais e dos rebanhos, sistema de criação, presença de outros animais, idade, sexo, raça, aptidão, condição física foram coletados por meio de questionários investigativos. Anticorpos IgG anti-Toxoplasma gondii foram detectados em 12,5% (50/400) dos animais analisados. Dos 12 municípios estudados, houve positividade em 91,67% (11/12) com variação entre 4,4% e 33,3%. Quando avaliados os fatores de risco, apenas o fator mesorregião (p=0,029) apresentou associação com a infecção, particularmente Zona da Mata (OR=3), seguida de Região Metropolitana do Recife (OR=2,2), Agreste (OR=1,7) e Sertão (OR=1). Os resultados revelam a presença do parasito na área estudada, o que pode representar um elo na cadeia de transmissão da toxoplasmose a qual tem repercussão em saúde pública tendo em vista que o Brasil é o oitavo maior exportador de carne equina do mundo.(AU)

This paper reports seroprevalence of toxoplasmosis in horses kept in different forms of breeding system in the state of Pernambuco. For that, 400 blood serum samples from clinically healthy horses were analyzed through the test of modified agglutination (MAT) considering cut-off of 1:25. Data related to the characteristics of the animals and herds, breeding system, presence of other animals, age, gender, breed, aptitude, and physical conditions were collected throughout investigative surveys. IgG anti-Toxoplasma gondii antibodies were detected in 12.5% (50/400) of the analyzed animals. In the 12 studied towns, there was a positivity in 91. 67% (11/12) with a variation between 4% and 33.3%. When the risk factors were evaluated, only the mesoregion factor (p=0.029) had an association with the infection, particularly the Zona da Mata region (OR=3), followed by the Recife Metropolitan Area (OR=2.2), Agreste region (OR=1.7) and Sertão region (OR=1). The results shows the presence of the parasites on the studied area, which may represent a link with the transmission chain of toxoplasmosis which has influence on the public health system, considering that Brazil is the eighth greatest exporter of equine meat in the world.(AU)

Transplacental transmission of Neospora caninum in naturally infected small ruminants from northeastern Brazil / Transmissão transplacentária de Neospora caninum em pequenos ruminantes infectados naturalmente do Nordeste do Brasil

Toxoplasma gondii and Neospora caninum are causative agents of abortion in sheep and goats. Thus, the present study aimed to describe the transplacental transmission of these protozoans in small ruminants of northeastern Brazil. Seventeen fetuses (6 goats and 11 sheep) from farms with history of abortion were necropsied and samples were collected from different tissues (brain, liver, lung, kidney and heart). The samples were analyzed by PCR, histopathology (HP) and immunohistochemistry (IHC) to evaluate whether T. gondii and/or N. caninum infection were the cause of abortion. None of the samples was positive for T. gondii according to PCR and IHC results. Some brain, liver, lung, kidney and heart samples of goat fetuses were positive for N. caninum by PCR. In the histopathology, mild mononuclear infiltration and necrosis with calcification were observed in the liver and brain of one goat fetus, respectively, that also was positive for N. caninum by PCR and IHC. The results confirmed vertical transmission of N. caninum in naturally infected goats of northeastern, Brazil.(AU)

Toxoplasma gondii e Neospora caninum são reconhecidos como protozoário causadores de aborto em ovinos e caprinos. Desta forma, objetivou-se descrever a transmissão transplacentária desses agentes em pequenos ruminantes na região Nordeste do Brasil. Foram examinados seis fetos caprinos e onze fetos ovinos, totalizando 78 amostras de diferentes tecidos (cérebro, fígado, pulmão, rim e coração) provenientes de propriedades rurais com histórico de aborto. As amostras foram analisadas por Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), Histopatologia (HP) e Imunohistoquímica (IHQ), com a finalidade de associar o abortamento a T. gondii e/ou N. caninum. Nenhuma amostra foi positiva na PCR e IHQ para T. gondii. Algumas amostras de cérebro, fígado, pulmão, rim e coração de fetos de caprinos e ovinos foram positivas na PCR para N. caninum. Na histopatologia foi observado leve infiltrado mononuclear no fígado e necrose com calcificação no SNC de um caprino, associada à imunomarcação positiva para N. caninum na IHQ e PCR positiva. Os resultados confirmam a transmissão vertical de N. caninum em caprinos naturalmente infectados na região nordeste do Brasil.(AU)

Achados microbiológicos, moleculares e histopatológicos em pequenos ruminantes experimentalmente infectados com Actinobacillus seminis / Microbiological, molecular and histopathological findings in small ruminants experimentally infected with Actinobacillus seminis

O objetivo deste trabalho foi avaliar a patogenicidade, em ovinos, de uma cepa de Actinobacillus seminis isolada de caprino no Brasil. Foram utilizadas amostras de sêmen, punção e fragmentos de epidídimo, ducto deferente, testículos e glândulas seminíferas de dois caprinos (animais 1 e 2) e dois ovinos (animais 3 e 4), e foram realizados exame histopatológico, cultivo microbiológico e diagnóstico molecular. O inóculo foi preparado com solução salina na diluição de 10-2 correspondendo ao padrão 1,0 da escala de McFarland, com colônias previamente cultivadas de A. seminis e administrado no volume de 2 mL pelas vias intra-prepucial (animais 1 e 3) e na cauda do epidídimo (animais 2 e 4). Na avaliação clínica observou-se aumento unilateral de consistência firme após 30 dias no epidídimo e testículo do animal 4 que continuou até o dia da eutanásia, bem como o animal 1 apresentou discreto aumento unilateral dos testículos. As lesões macroscópicas e microscópicas observadas nos animais 3 e 4 foram compatíveis com aquelas causadas pela infecção por A. seminis. A. seminis foi isolado de material de punção e sêmen de um ovino (animal 4). Conclui-se que o modelo de infecção experimental utilizando caprinos e ovinos comprovou a patogenicidade da amostra de A. seminis, isolada de um caprino no semiárido brasileiro e reproduzida em um ovino, comprovando a predileção do agente pelo epidídimo, com quadro clinico, achados histopatológicos, isolamento bacteriano e diagnóstico molecular positivo.(AU)

The aim of this study was to evaluate, in sheep, the pathogenicity of an Actinobacillus seminis strain isolated from a goat in Brazil. Samples of semen, puncture and fragments of epididymis, deferent duct, testicles and seminal vesicles from two goats (animals 1 and 2) and two sheep (animals 3 and 4) were used, and histopathological, microbiological culture and molecular diagnoses were performed. The inoculum was prepared with saline solution at 10-2 dilution corresponding to 1.0 McFarland standard, with A. seminis colonies previously cultured and administered on 2mL volume by intra-preputial (animals 1 and 3) and epididymis tail (animals 2 and 4) routes. At clinical evaluation it were found unilateral swelling of firm consistency after 30 days in epididymis and testicle from animal 4 that continued until the day of euthanasia, as well as animal 1 shown discrete unilateral swelling of testicles. Gross and microscopic lesions in animals 3 and 4 were compatibles with that caused by A. seminis infection. A. seminis was isolated from material of puncture and semen of one sheep (animal 4). It is concluded that the experimental infection model using goats and sheep has proved the pathogenicity of the A. seminis strain isolated from a goat in the Brazilian semiarid and reproduced in a sheep, which confirm the prediletion of the agent for epididymis, with clinical signs, histopathological findings, bacterial isolation and positive molecular diagnosis.(AU)

Atividade antimicrobiana de moléculas bioativas produzidas por Streptomyces parvulus DPUA 1573 frente a Staphylococcus spp. multirresistentes de mastite bubalina / Antimicrobial activity of bioactive molecules produced by Streptomyces parvulus DPUA 1573 against Staphylococcus spp. multi-drug resistant isolates from mastitis buffalo

A mastite é uma inflamação na glândula mamária que pode acarretar perdas na produção e na qualidade do leite, gerando prejuízos econômicos para a pecuária leiteira. O tratamento é baseado na utilização de antibióticos, sendo, em muitos casos, ineficazes devido à resistência bacteriana já conhecida para esta doença. O objetivo deste trabalho foi selecionar linhagens de Streptomyces spp. produtoras de biocompostos com atividade antimicrobiana frente a isolados do gênero Staphylococcus multirresistentes de búfalas com mastite. Bem como, determinar os melhores parâmetros de produção, e avaliar a produção simultânea de ácido clavulânico. A seleção de Streptomyces spp. com capacidade de produzir compostos com atividade antimicrobiana foi realizada através da técnica bloco de gelose. Dentre as 30 espécies de Streptomyces spp. testadas, o micro-organismo Streptomyces parvulus DPUA 1573 apresentou melhores resultados, sendo capaz de inibir o crescimento de 7 isolados Staphylococcus spp. multirresistentes. Posteriormente, a espécie selecionada Streptomyces parvulus DPUA 1573 foi cultivada em diferentes condições pré-determinadas pelo planejamento fatorial 24, onde as variáveis independentes foram: concentração de soja (0,5; 1,0; 1,5%), glicose (0; 0,5; 1g/L), agitação (150; 200; 250rpm) e temperatura (28; 32; 37°C) e todos os ensaios do planejamento foram monitorados até 120 horas de cultivo. Todas as variáveis independentes influenciaram positivamente no crescimento celular, enquanto que para atividade antimicrobiana apenas as variáveis temperatura e agitação apresentaram efeitos significativos positivos. O líquido metabólito produzido por Streptomyces parvulus DPUA 1573 foi capaz de inibir o crescimento de sete Staphylococcus spp. multirresistentes. As melhores condições de cultivo para a produção de moléculas bioativas por este micro-organismo foi a 37?C, com 250rpm de agitação por período de 72 horas. Nos ensaios que apresentaram atividade antimicrobiana, foi avaliada a produção de ácido clavulânico ao longo do cultivo. A maior concentração de ácido clavulânico foi de 269,84g/L obtidas nas condições de 1,5% de farinha de soja em ausência de glicose no tempo de 96 horas. A linhagem Streptomyces parvulus DPUA 1573 foi eficiente contra Staphylococcus spp. multirresistentes isolados de mastite em búfalas, ainda apresentando concomitantemente produção de ácido clavulânico com o potencial uso farmacêutico.(AU)

Mastitis is an inflammation in one or more mammary glands which can lead to reduction in production and quality of milk causing economic losses to dairy farming. The use of antibiotics is the key for the treatment of this disease, but in many cases ineffective due to bacterial resistance already known for this condition. The aim of this study was to select strains of Streptomyces spp. producing biomolecules with antimicrobial activity against multidrug-resistant Staphylococcus isolated from buffaloes with mastitis, as well as to determine the best production parameters to the evaluation of simultaneous production of clavulanic acid. Thirty species of Streptomyces spp. were used to selecting the greatest producer spectrum of antimicrobial activity (agar block technique), with selection of Streptomyces parvulus DPUA 1573, and 7 multidrug-resistant Staphylococcus spp. sensitive to its biocompounds. The selected strain of Streptomyces parvulus DPUA 1573 was cultured in different conditions predetermined by the factorial design 24, where the independent variables were: soybean concentration (0.5, 1.0, 1.5%), glucose (0, 0.5, 1g/L), agitation (150, 200, 250rpm) and temperature (28, 32, 37°C); all the tests were monitored up to 120 hours of cultivation. All independent variables influenced positively the cell growth, while for antimicrobial activity only the variables temperature and agitation showed positive effects. The antimicrobial bio compounds showed activity against seven multidrug-resistant Staphylococcus spp under the conditions: temperature 37°C, agitation 250rpm, with 72 hours of production process. In the tests which showed antimicrobial activity, was also assessed the production of clavulanic acid along with the cultivation. The highest concentration of clavulanic acid was 269.84g/L obtained under the conditions of 1.5% of soybean flour and absence of glucose in 96 hours. The strain Streptomyces parvulus DPUA 1573 was effective against multidrug-resistant strains of Staphylococcus spp. of mastitis from buffaloes, still showing concomitantly production of clavulanic acid for pharmaceutical use.(AU)

Isolamento microbiológico do canal auditivo de cães saudáveis e com otite externa na região metropolitana de Recife, Pernambuco / Microbiological isolation from the ear canal of healthy dogs and with otitis externa in the metropolitan region of Recife, Pernambuco

Otite externa (OE) é o termo utilizado para definir a inflamação do conduto auditivo externo; esta doença possui diversas etiologias, ocorre em várias espécies e é particularmente frequente em cães. Os microrganismos da microbiota residente comumente estão envolvidos na etiopatogenia da OE, sendo apontados como agentes perpetuadores da doença. O objetivo deste estudo foi investigar o perfil microbiológico de cães com conduto auditivo saudável e com otite na região metropolitana do Recife. Com o auxílio de suabes estéreis foram coletadas amostras das orelhas direita e esquerda de 41 cães, sendo 11 com OE e 30 sem OE. Foi realizado o isolamento bacteriano e fúngico das amostras cultivadas; observou-se positividade em 80% dos cães com orelhas saudáveis e presença de mais de um microrganismo em 38 amostras (63,3%); já nos cães com OE, a positividade foi 95,3%, com infecção polimicrobiana em 77,3% das amostras. No que se refere aos gêneros bacterianos, o perfil de isolamento microbiológico foi idêntico entre os cães otopatas e sadios. Os microrganismos isolados foram Staphylococcus sp., Micrococcus, Bacillus sp., Streptococcus sp. e Malassezia sp.

Otitis externa (OE) is the term used to describe inflammation of the external ear canal. This disease has many etiologies, occurs in several species and is particularly common in dogs. The resident microbiota microorganisms are commonly involved in the OE etiopathogenesis, being frequently appointed as perpetuator agents. The aim of this study was to investigate the microbiological profile of dogs with healthy ears and of others with otitis in the metropolitan region of Recife, Pernambuco, Brazil. With the aid of sterile swabs, samples of right and left ear of 41 dogs, 11 with and 30 without OE, were collected. Bacterial and fungal isolation was performed with cultured samples; positivity was observed in 80% of animals with healthy ears, with the presence of more than one microrganism in 38 samples (63.3%), whereas in dogs with OE, the positivity was 95.3% with polymicrobial infection in 77.3% samples. With regard to the genus, the microbiological profile was identical between healthy and diseased dogs. The microrganisms isolated were Staphylococcus sp., Micrococcus, Bacillus sp., Streptococcus sp. and Malassezia sp.

Diagnóstico de paratuberculose por biópsia retal em búfalos / Rectal biopsy for the diagnosis of paratuberculosis in buffaloes

Foram realizadas biópsias retais de 140 búfalos, machos e fêmeas, das raças Murrah e mestiços de Murrah com Mediterrâneo, com idade acima de três anos, em uma propriedade no município de São Mateus, Maranhão, Brasil. Adicionalmente foram realizadas necropsias de 11 búfalos, para realizar um estudo comparativo entre os achados das biópsias retais e de tecidos de íleo e linfonodo mesentérico. A propriedade apresentava histórico de animais com emagrecimento progressivo e diarreia não responsiva a antimicrobianos. Os búfalos apresentavam sinais clínicos caracterizados por diarreia, estado nutricional regular a ruim, desidratação e edema submandibular. Nas biópsias retais seis búfalos apresentaram lesões sugestivas da paratuberculose na Hematoxilina-Eosina (HE), sendo estas caracterizadas por inflamação granulomatosa multifocal moderada na lâmina própria com macrófagos epitelioides. Em quatro animais foram observadas adicionalmente células gigantes do tipo Langhans. Em 15 búfalos foi observado infiltrado linfocitário multifocal leve na lâmina própria. Pela coloração de Ziehl-Neelsen (ZN), 4,3% (6/140) apresentaram bacilos álcool-ácido resistentes (BAAR) e na PCR em tempo real (qPCR), 5,71% (7/140) tiveram amplificação do material genético. Foram necropsiados 11 búfalos, à necropsia foram observados aumento de linfonodos mesentéricos com áreas esbranquiçadas na superfície de corte; intestino delgado e grosso com dobras transversais evidentes, mucosa espessada e irregular, de aspecto reticulado, placas de Peyer evidentes e conteúdo líquido e marrom. Ainda se viam áreas espessadas em torno da válvula ileocecal e vasos linfáticos evidentes. As lesões histológicas localizadas no intestino delgado e linfonodos mesentéricos de quatro búfalos foram compatíveis com lesões já descritas na literatura, e apresentaram BAAR e amplificação de material genético na qPCR. A concordância entre a biópsia retal e a análise dos tecidos de íleo e linfonodo mesentérico, segundo...

Paratuberculosis in a herd of buffaloes was studied in the municipality of São Mateus, Maranhão, Brazil. Rectal biopsies were performed in 140 male and female Murrah, Mediterranean and crossbreed buffaloes older than 3 years. Postmortem examination of 11 buffaloes was performed to compare the rectal biopsies with possible lesions in mesenteric nodes and the intestine. The history of the herd and clinical examination revealed progressive weight loss and non-responsive antimicrobial diarrhea, dehydration and submandibular edema. Rectal biopsies showed in six buffaloes microscopically suggestive lesions for paratuberculosis through hematoxilin-eosin staining (HE), characterized by moderate multifocal granulomatous enteritis with epithelioid cell infiltration. In four buffaloes Langhans giant cells were found. In 15 buffaloes lymphocytic infiltrate was observed in the lamina propria of the large intestine. Ziehl-Neelsen staining (ZN) revealed in 4.3% (6/140) acid-fast bacilli in the rectal mucosa. Real time PCR amplified to 5.71% (7/140) Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map) DNA. 11 buffalos were submitted to postmortem examination, gross examination revealed augmented mesenteric nodes with whitish areas in the cut surface. The mucosa of the small intestine was irregular and thickened, with evident traverse folds and Peyer plates. The brownish intestinal content was fluid, the ileocecal valve area thickened and edematous with evident lymphatic vessels. Histological lesions in the mesenteric lymph node and small intestine four buffalo were compatible with those already described in the literature, and presented acid-fast bacilli by ZN staining and amplification of Map genetic material in qPCR. The concordance between the rectal biopsy and the postmortem samples was in agreement with the Kappa test (K=0.792) and was considered substantial or high. The rectal biopsy showed to be promising and can be used by practitioners, together with other...

Occurrence and risk factors assessment associated with Mycoplasma gallisepticum (MG) infection in chickens in the semiarid region of Pernambuco, Brazil / Ocorrência e fatores de riscos associados à infecção por Mycoplasma gallisepticum em galinhas na região Semiárida do estado de Pernambuco

The aim of the present study was to assess the occurrence of Mycoplasma gallisepticum (MG) infection and risk factors of this disease in three hundred serum samples from on 23 familiar agricultural properties in the semiarid region of the state of Pernambuco, Brazil. ELISA was used to study antibodies anti-Mycoplasma gallisepticum. The univariate analysis (chi-squared test or Fischer's exact test) followed by multivariate analysis (logistic regression) were used to assess the risk factors with two variables: management and sanity of the poultry. It was detected a frequence of 53.33% (157/300) of the birds were positive for MG, with 100% foci. The risk factors confirmed by multivariate analysis, in the present study, were the presence of other poultry species on the property, including Numida meleagris (OR=2.22; p=0.005), parrots (OR=1.72; p=0.027), and of passerines (OR=1.88; p=0.007). These results showed that Mycoplasma gallisepticum infection is endemic among backyard poultry in the semiarid region of the state of Pernambuco. These birds could be a source of infection for other wild or domestic poultry. . This is the first report of the occurrence of avian mycoplasmosis in backyard poultry in the state of Pernambuco in northeastern Brazil. The risk factors identified should serve as a parameter for the health authorities to seek solutions related to controlling the disease.

Objetivo do presente estudo foi avaliar a ocorrência de infecção por Mycoplasma gallisepticum (MG) e os fatores de risco dessa doença em trezentas amostras de soro sanguíneo de galinhas domésticas em 23 propriedades da agricultura familiar na região semiárida do estado de Pernambuco, Brasil. Para a pesquisa de anticorpos contra Mycoplasma gallisepticum utilizou-se o Ensaio Imunoenzimático (ELISA). A análise univariada (Qui-quadrado ou Exato de Fischer) seguida pela análise multivariada (Regressão Logística) foram utilizadas para avaliar os fatores de risco com duas variáveis: manejo e sanidade das aves. Foi detectada uma frequência de 53,33% (157/300) de aves soropositivas para MG com 100% de focos. Os fatores de risco confirmados na análise multivariada, neste estudo, foram a criação de outras espécies de aves na propriedade como Numida meleagris(OR=2,22; p=0,005), criação de diferentes espécies de psitacídeos (OR=1,72; p=0,027) e a criação de passeriformes (OR=1,88; p=0,007). Estes resultados demonstram que a infecção por Mycoplasma gallisepticum é endêmica entre galinhas de criação doméstica na região semiárida do estado de Pernambuco. Estas aves podem atuar como fonte de infecção para outras aves silvestres e domésticas. Este é o primeiro relato da ocorrência de micoplasmose aviária em galinhas de criação doméstica no estado de Pernambuco, nordeste do Brasil. Os fatores de risco identificados devem servir como um parâmetro para as autoridades sanitárias buscarem soluções de controle da doença.